試劑、試劑盒          

Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物

儀器、耗材    

熱循環(huán)儀

實(shí)驗(yàn)步驟      

一、材料

1. 酶和酶緩沖液

Taq 聚合酶

許多 Taq 聚合酶都可以用；作者發(fā)現(xiàn) Roche 公司的 Taq 聚合酶可以滿足大多數(shù)需要. 如果需要提高PCR 產(chǎn)物的特異性，應(yīng)該使用熱啟動(dòng)聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附帶的緩沖液。

2. 核酸和寡核苷酸

（1）溶于水的 DNA

如果 DNA 在 TE 中，應(yīng)該在 PCR 反應(yīng)混合物中添加 MgCl2. 如果用從石蠟包埋的組織中純化的DNA 做模板，選擇的 STR 標(biāo)記的大小應(yīng)該是 78~250bp, 因?yàn)檫@些 DNA 模板的完整性不定。

參照 DNA 可以從外周血組織或者非惡性組織中純化獲得。對(duì)于白血病，則難以獲得腫瘤 DNA 的合適的參照 DNA。因此，使用從患病期間和之后的血液中提取的 DNA 作參照進(jìn)行分析。

腫瘤 DNA。很難避免非惡性細(xì)胞對(duì)腫瘤組織的污染。對(duì)腫瘤組織進(jìn)行顯微解剖是避免污染的一種途徑，但是該過程費(fèi)時(shí)，而且產(chǎn)量低（參見第 11 章）.

為了保證獲得 LOH 分析的信患，應(yīng)該分析大量的樣品。因此，純化過程必須是可靠的，可重復(fù)的，保證可以從大量的樣品中提取出高質(zhì)量的 DNA。—種評(píng)估腫瘤 DNA 質(zhì)董的方法就是利用一部分樣品，使用 STR 對(duì)已經(jīng)確定的特異類型的腫瘤染色體上的 LOH 進(jìn)行分析。

（2）引物

重要的一點(diǎn)就是細(xì)心地選擇熒光基團(tuán)以確保在所用的電泳儀器上能被檢測(cè)到。例如，綠色的 TET 就不能在 ABI3100 儀器上使用。

標(biāo)記的引物儲(chǔ)備液可以保存在-20°C, 稀釋之后的工作液可以在 4°C 保存. 放置黑盒中避光。

3. 專用設(shè)備

熱循環(huán)儀