染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗

簡要描述：真核生物的基因組DNA以染色質(zhì)的形式存在，研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。與傳統(tǒng)的EMSA技術(shù)相比，染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗（CHIP）能真實(shí)完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白，是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的佳方法。

更新時間：2022-12-22
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詳細(xì)介紹

染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法，在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。近年來，這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。

原理

是在活細(xì)胞狀態(tài)下以甲醛固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，超聲將其隨機(jī)切斷為長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后加入目的蛋白抗體，通過抗體沉淀靶蛋白-DNA復(fù)合物，通過洗脫的方法得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA的片段，通過對目的片斷的純化與檢測（PCR分析），從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

應(yīng)用

1.組蛋白修飾研究

2.轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析

3.有絲分裂研究

4.DNA損傷與凋亡分析

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