MTT實驗

簡要描述：MTT實驗，全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法，是一種常用于檢測細胞存活和生長的體外實驗方法。該方法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱訫TT還原成不溶于水的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan），而死細胞缺乏這種功能。通過測定溶液中甲臜的光吸收值，可以間接反映活細胞的數(shù)量。

更新時間：2024-10-11
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MTT實驗，全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法，是一種常用于檢測細胞存活和生長的體外實驗方法。該方法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱訫TT還原成不溶于水的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan），而死細胞缺乏這種功能。通過測定溶液中甲臜的光吸收值，可以間接反映活細胞的數(shù)量。MTT實驗因其靈敏度高、經(jīng)濟實用而被廣泛應(yīng)用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等領(lǐng)域。

實驗步驟

1.細胞培養(yǎng)：將對數(shù)生長期的細胞接種到96孔板中，并在適宜的條件下培養(yǎng)至細胞單層鋪滿孔底。

2.藥物處理：向含有細胞的孔中加入不同濃度的測試藥物，并繼續(xù)培養(yǎng)一段時間。

3.MTT添加：向每個孔中加入MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)以允許活細胞將MTT還原。

4.終止培養(yǎng)：停止培養(yǎng)后，去除孔內(nèi)的培養(yǎng)液，并用二甲基亞砜（DMSO）溶解甲臜結(jié)晶。

5.比色測定：在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔的吸光度值，通常在490nm或570nm波長處進行測量。

6.數(shù)據(jù)分析：根據(jù)吸光度值計算細胞的相對生存分數(shù)或抑制率，并進一步分析藥物的效力。

注意事項

1.MTT溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并在避光條件下保存。

2.實驗過程中應(yīng)避免交叉污染，并注意使用無菌技術(shù)。

3.在離心和吸液步驟中，應(yīng)輕柔操作以保護細胞。

4.溶解結(jié)晶物時，應(yīng)充分振蕩以確保wanquan溶解。

5.實驗結(jié)果的線性范圍通常建議在OD值0-0.7之間。

6.MTT法只能用來檢測細胞的相對數(shù)和相對活力，不能直接測定細胞的絕對數(shù)。

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