小鼠流感模型構建

簡要描述：小鼠流感模型構建是一種重要的實驗研究工具，用于模擬人類流感病毒感染過程。通過將流感病毒接種到小體內鼠，可以觀察到小鼠出現類似人類流感的臨床癥狀，如發熱、體重下降、呼吸困難等。

更新時間：2025-07-09
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一、模型建立核心要素

（一）病毒毒株與適應株

常用毒株：

H1N1 PR8（A/Puerto Rico/8/34）：標準實驗室株，致病性穩定，廣泛用于基礎研究。
H9N2（A/swine/Jiangsu/C1/08）與 H1N1 SD731（A/swine/Shandong/731/2009）：用于模擬亞型特異性感染。
新甲型H1N1：需通過鼠肺傳代獲得適應株（如SC/09），提高小鼠致死率。

病毒制備：

擴增：病毒接種9-11日齡SPF雞胚，收獲尿囊液分裝保存（-80℃）。
滴度：感染劑量通常為 1×10? TCID??/50μL 或 250 PFU（鼻內接種）.

（二）感染途徑與方法

感染方式	操作要點	適用場景
鼻內接種	麻醉小鼠后滴鼻接種病毒懸液（50μL）	操作簡單，模擬上呼吸道感染
氣霧攻擊	霧化H1N1 FM1/PR8病毒，小鼠吸入感染	更接近自然感染，但需專用設備
顱內注射	注射病毒至耳根與眼角連線處（0.03mL, TCID??=10?3）	神經系統感染研究（如腦炎）
雙重感染模型	先接種流感病毒（H3N2），3天后感染HSV-1，檢測細胞因子與免疫細胞變化	研究病毒共感染機制

關鍵參數：
麻醉推薦異氟醚（安全可控）或干冰（快速）。
氣霧感染需控制霧化顆粒直徑（1-5μm）以深入肺泡。

（三）動物品系選擇

品系	病毒敏感性	病理特征
BALB/c	中高度敏感，H1N1感染后肺損傷顯著	炎癥因子（IL-6、TNF-α）升高明顯
C57BL/6	對H3N2抵抗較強，H1N1易感性中等	適合免疫機制研究（T細胞應答）
DBA/2J	高敏感性（尤其H1N1），體重減輕顯著、死亡率高	強細胞因子風暴，肺病理損傷更重
ICR	廣譜易感，氣霧感染后肺指數升高快	適合急性感染病理觀察

注：
雌性BALB/c小鼠更常用（體重15-20g，SPF級）。
DBA/2J品系可增強發病癥狀，但需注意高死亡率風險。

二、疾病進程與評估指標

（一）臨床監測

生存指標：

體重下降：感染后3天開始下降，>20%需人道終點處理。
存活率：重度模型（如PR8）感染后7天死亡率可達80%。

行為評分：

活動減少、扎堆蜷縮、呼吸急促、毛發脫落。

體溫變化：

非發熱模型：核心體溫下降（與人類發熱相反）。
濕熱證模型：高脂飼料+熱應激后肛溫升高（表1）：

組別	肛溫（℃）
正常組	36.8±0.3
病毒組	35.2±0.4a
模型組	37.5±0.6ab

（二）器官損傷評估

肺指數（核心指標）：

公式：肺指數 = 肺濕重（g）/ 體重（g） × 100。
陽性標準：感染組肺指數顯著高于對照組（P<0.05）。

肺病理分級：

+：炎細胞浸潤，毛細血管充血；
++：肺泡滲出物增多，部分實變；
+++：肺組織大面積實變。

多器官指標：

肝損傷：ALT/AST升高。
腎損傷：血肌酐（Cre）≥2倍基礎值。

（三）分子與免疫檢測

檢測類別	指標	技術方法
病毒載量	肺勻漿病毒滴度、RT-qPCR檢測病毒RNA	細胞病變效應（CPE）、空斑試驗
炎癥因子	IL-6、TNF-α、IFN-γ	ELISA（血清/肺泡灌洗液）
免疫細胞變化	NK細胞、T細胞亞群（CD4?/CD8?）、樹突狀細胞	流式細胞術
血氧與組織缺氧	血氧飽和度（SpO?）	MouseOx Plus脈搏xue氧儀

動態監測：
炎癥峰值：感染后12-24h（IL-6、TNF-α）。
器官衰竭期：24-48h（肺實變、血氧驟降）

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